Plant- en patogeenmateriaal
'n Sorghum-assosiasiekarteringspopulasie, bekend as die sorghum-omskakelingspopulasie (SCP), is deur dr. Pat Brown aan die Universiteit van Illinois (nou by UC Davis) verskaf. Dit is voorheen beskryf en is 'n versameling van diverse lyne wat omgeskakel is na fotoperiode-ongevoeligheid en kleiner statuur om die groei en ontwikkeling van die plante in Amerikaanse omgewings te vergemaklik. 510 lyne van hierdie populasie is in hierdie studie gebruik, alhoewel as gevolg van swak ontkieming en ander kwaliteitsbeheerprobleme, nie al die lyne in die analise van al drie eienskappe gebruik is nie. Uiteindelik is data van 345 lyne gebruik vir die analise van die chitienrespons, 472 lyne vir die flg22-respons en 456 vir TLS-weerstand.B. cookeistam LSLP18 is verkry van Dr. Burt Bluhm aan die Universiteit van Arkansas.
MAMP-responsmeting
Twee verskillende MAMP's is in hierdie studie gebruik, flg22 (Genscript-katalogus # RP19986), en chitien. Sorghumplante is gekweek in insetsels wat op vlaktes gevul met grond (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) in die kweekhuis gelê is. Plante is die dag voor monsterversameling natgemaak om ekstra blaarvog op die dag van versameling te vermy.
Die lyne is gerandomiseer en, om logistieke redes, in groepe van 60 lyne geplant. Vir elke lyn is drie 'potte' geplant met twee sade per lyn. Daaropvolgende groepe is geplant sodra die vorige groep verwerk is totdat die hele populasie geassesseer is. Twee eksperimentele lopies is vir beide MAMP's uitgevoer met genotipes wat in elk van die twee lopies hergerandomiseer is.
ROS-toetse is uitgevoer soos voorheen beskryf. Kortliks, vir elke lyn is ses sade in 3 verskillende potte geplant. Uit die gevolglike saailinge is drie gekies op grond van eenvormigheid. Saailinge wat ongewoon gelyk het of aansienlik langer of korter as die meerderheid was, is nie gebruik nie. Vier blaarskyfies van 3 mm deursnee is uitgesny uit die breedste deel van die 4de blaar van drie verskillende 15-dae oue sorghumplante. Een skyf per blaar van twee plante en twee skyfies van een plant, met die tweede skyf wat die waterkontrole word (sien hieronder). Die skyfies is individueel op 50 µl H20 in 'n swart 96-putplaat gedryf, verseël met 'n aluminiumseël om blootstelling aan lig te vermy, en oornag by kamertemperatuur gehou. Die volgende oggend is 'n reaksieoplossing gemaak met behulp van 2 mg/ml chemiluminescerende probe L-012 (Wako, katalogus # 120-04891), 2 mg/ml peperwortelperoksidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalogus # P6782), en 100 mg/ml Chitien of 2 μM Flg22. 50 µl van hierdie reaksieoplossing is by drie van die vier putjies gevoeg. Die vierde putjie was 'n namaakkontrole, waaraan die reaksieoplossing sonder die MAMP bygevoeg is. Vier leë putjies wat slegs water bevat het, is ook in elke plaat ingesluit.
Nadat die reaksieoplossing bygevoeg is, is die luminessensie gemeet met behulp van 'n SynergyTM 2 multi-deteksie mikroplaatleser (BioTek) elke 2 minute vir 1 uur. Die plaatleser neem luminessensiemetings elke 2 minute gedurende hierdie 1 uur. Die som van al 31 lesings is bereken om die waarde vir elke putjie te gee. Die beraamde waarde vir die MAMP-respons vir elke genotipe is bereken as (gemiddelde luminessensiewaarde van die drie eksperimentele putjies - die skynputwaarde) - minus die gemiddelde leë putwaarde. Die leë putwaardes was konsekwent naby aan nul.
Blaarskywe vanNicotiana benthamiana, een hoogs responsiewe sorghumlyn (SC0003), en een laag responsiewe sorghumlyn (PI 6069) is ook as kontroles in elke 96-putplaat ingesluit vir kwaliteitsbeheerdoeleindes.
B. cookeiinokulumvoorbereiding en inokulasie
B. cookeiInokulum is voorberei soos voorheen beskryf. Kortliks, sorghumkorrels is vir drie dae in water geweek, afgespoel, in 1L koniese flesse geskep en vir 'n uur by 15psi en 121 °C outoklaaf. Die korrels is toe geënt met ongeveer 5 ml gemasereerde miselium uit 'n vars kultuur vanB. cookeiLSLP18-isolate is gefiltreer en vir 2 weke by kamertemperatuur gelaat, terwyl die flesse elke 3 dae geskud is. Na 2 weke is die swam-besmette sorghumkorrels luggedroog en toe by 4 °C gestoor tot veld-inenting. Dieselfde inokulum is vir die hele proefneming gebruik en elke jaar vars gemaak. Vir inenting is 6-10 besmette korrels in die krans van 4-5 weke oue sorghumplante geplaas. Die spore wat van hierdie swamme geproduseer is, het binne 'n week infeksie in die jong sorghumplante geïnisieer.
Saadvoorbereiding
Voor plant in die land is sorghumsaad behandel met 'n swamdoder-, insekdoder- en beveiligingsmiddelmengsel wat ~ 1% Spirato 480 FS swamdoder, 4% Sebring 480 FS swamdoder en 3% Sorpro 940 ES saadbeveiliger bevat het. Daarna is die sade vir 3 dae in die lug gedroog, wat 'n dun lagie van hierdie mengsel om die sade verskaf het. Die beveiligingsmiddel het die gebruik van die onkruiddoder Dual Magnum as 'n vooropkomsbehandeling moontlik gemaak.
Evaluering van Teikenblaarvlekweerstand
Die SCP is op 14–15 Junie 2017 en 20 Junie 2018 by die Central Crops Research Station in Clayton, NC, geplant in 'n gerandomiseerde volledige blokontwerp met twee eksperimentele replikasies in elke geval. Eksperimente is in 1,8 m enkelrye met 'n 0,9 m rywydte geplant met 10 sade per perseel. Twee randrye is rondom die omtrek van elke eksperiment geplant om rand-effekte te voorkom. Die eksperimente is op 20 Julie 2017 en 20 Julie 2018 ingeënt, op welke stadium die sorghumplante in groeistadium 3 was. Graderings is geneem op 'n een tot nege skale, waar plante wat geen tekens van siekte toon nie, as 'n nege gegradeer is en heeltemal dooie plante as een gegradeer is. Twee graderings is in 2017 geneem en vier lesings in 2018, beginnende twee weke na inenting elke jaar. sAUDPC (gestandaardiseerde area onder siekteprogressiekurwe) is bereken soos voorheen beskryf.
Plasingstyd: 1 April 2021