Plant- en patogeenmateriaal
'n Sorghumvereniging kartering populasie bekend as die sorghum omskakeling bevolking (SCP) is verskaf deur Dr. Pat Brown by die Universiteit van Illinois (nou by UC Davis).Dit is voorheen beskryf en is 'n versameling uiteenlopende lyne wat omgeskakel is na fotoperiode-onsensitiwiteit en kleiner statuur om die groei en ontwikkeling van die plante in Amerikaanse omgewings te fasiliteer.510 lyne van hierdie populasie is in hierdie studie gebruik, alhoewel as gevolg van swak ontkieming en ander kwaliteitbeheerkwessies, nie al die lyne in die ontleding van al drie eienskappe gebruik is nie.Uiteindelik is data van 345 lyne gebruik vir die ontleding van die chitienrespons, 472 reëls vir die flg22-respons en 456 vir TLS-weerstand.B. cookeistam LSLP18 is verkry van Dr. Burt Bluhm aan die Universiteit van Arkansas.
MAMP-reaksiemeting
Twee verskillende MAMPs is in hierdie studie gebruik flg22, (Genscript catalogue# RP19986), en chitien.Sorghumplante is gekweek in insetsels wat gelê is op woonstelle gevul met grond (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) in die kweekhuis.Plante is die dag voor monsterversameling natgemaak om ekstra blaarvog op die dag van versameling te vermy.
Die lyne is ewekansig en, om logistieke redes, in groepe van 60 lyne geplant.Vir elke lyn is drie 'potte' geplant met twee sade per lyn.Daaropvolgende groepe is geplant sodra die vorige bondel verwerk is totdat die hele populasie geassesseer is.Twee eksperimentele lopies is uitgevoer vir beide MAMP's met genotipes wat in elk van die twee lopies her-ekans is.
ROS-toetse is uitgevoer soos voorheen beskryf.Kortliks, vir elke lyn is ses sade in 3 verskillende potte geplant.Uit die gevolglike saailinge is drie gekies op grond van eenvormigheid.Saailinge wat ongewoon gelyk het of aansienlik langer of korter as die meerderheid was, is nie gebruik nie.Vier blaarskyfies van 3 mm deursnee is uit die breedste deel van die 4de blaar van drie verskillende 15 dae oue sorghumplante gesny.Een skyf per blaar van twee plante en twee skywe van een plant, met die tweede skyf wat die waterbeheer word (sien hieronder).Die skyfies is individueel op 50 µl H20 in 'n swart 96-put plaat gedryf, verseël met 'n aluminium seël om blootstelling aan lig te vermy, en oornag by kamertemperatuur gehou.Die volgende oggend is 'n reaksie-oplossing gemaak met behulp van 2 mg/ml chemiluminescerende sonde L-012 (Wako, katalogus # 120-04891), 2 mg/ml peperwortelperoksidase (Tipe VI-A, Sigma-Aldrich, katalogus # P6782), en 100 mg/ml Chitien of 2 μM Flg22.50 µl van hierdie reaksieoplossing is by drie van die vier putte gevoeg.Die vierde put was 'n skynkontrole, waarby die reaksieoplossing met uitsluiting van die MAMP gevoeg is.Vier leë putte wat slegs water bevat, is ook by elke plaat ingesluit.
Nadat die reaksie-oplossing bygevoeg is, is die luminesensie gemeet met SynergyTM 2 multi-opsporing mikroplaatleser (BioTek) elke 2 min vir 1 uur.Die plaatleser neem luminesensiemetings elke 2 min gedurende hierdie 1 uur.Die som van al 31 lesings is bereken om die waarde vir elke put te gee.Die geskatte waarde vir die MAMP-reaksie vir elke genotipe is bereken as (gemiddelde luminesensiewaarde van die drie eksperimentele putte—die skynputwaarde) -minus die gemiddelde blanko putwaarde.Die leë putwaardes was deurgaans naby aan nul.
Blaarskywe vanNicotiana benthamiana, een hoë-responsiewe sorghumlyn (SC0003), en een lae-responsiewe sorghumlyn (PI 6069) is ook ingesluit as kontroles in elke 96-put plaat vir kwaliteit beheer doeleindes.
B. cookeiinokulum voorbereiding en inenting
B. cookeiinokulum is voorberei soos voorheen beskryf.Kortliks, sorghumkorrels is vir drie dae in water geweek, gespoel, in 1L koniese flesse opgeskep en vir 'n uur by 15psi en 121 °C geoutoklaveer.Die korrels is dan geënt met ongeveer 5 ml gemasereerde miselium van 'n vars kultuur vanB. cookeiLSLP18 isoleer en gelaat vir 2 weke by kamertemperatuur, skud die flesse elke 3 dae.Na 2 weke is die swam besmette sorghumkorrels lugdroog en dan by 4 °C gestoor tot veldenting.Dieselfde inokulum is vir die hele proef gebruik en elke jaar vars gemaak.Vir inenting is 6-10 besmette korrels in die kol van 4-5 weke oue sorghumplante geplaas.Die spore wat uit hierdie swamme geproduseer word, het binne 'n week infeksie in die jong sorghumplante geïnisieer.
Saad voorbereiding
Voor plant in die veld is sorghumsaad behandel met 'n swamdoder, insekdoder en beveiliger mengsel wat ~ 1% Spirato 480 FS swamdoder, 4% Sebring 480 FS swamdoder, 3% Sorpro 940 ES saadbeskermer bevat.Daarna is die sade vir 3 dae lugdroog, wat 'n dun laag van hierdie mengsel om die sade verskaf het.Die beveiliger het die gebruik van die onkruiddoder Dual Magnum as 'n voor-opkomsbehandeling toegelaat.
Evaluering van teikenblaarvlekweerstand
Die SCP is op 14–15 Junie 2017 en 20 Junie 2018 by die Sentrale Gewassenavorsingstasie in Clayton, NC geplant in 'n ewekansige volledige blokontwerp met twee eksperimentele herhalings in elke geval.Eksperimente is in 1,8 m enkelrye met 'n 0,9 m rywydte geplant met 10 sade per perseel.Twee randrye is rondom die periferie van elke eksperiment geplant om randeffekte te voorkom.Die eksperimente is op 20 Julie 2017 en 20 Julie 2018 geënt, waarna die sorghumplante in groeistadium 3 was. Graderings is op 'n een tot nege skale geneem, waar plante wat geen tekens van siekte toon nie as 'n nege en heeltemal gepunt is. dooie plante is as een aangeteken.Twee graderings is in 2017 geneem en vier lesings in 2018 wat elke jaar twee weke na inenting begin.sAUDPC (gestandaardiseerde area onder siekte vorderingskurwe) is bereken soos voorheen beskryf.
Postyd: Apr-01-2021